高效液相色谱仪测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量

本文系统研究了苹果酒有机酸高效液相色谱仪的分析方法，优化了色谱柱的型号、流相比、流速、检测波长等色谱条件。

1、实验材料

实验室制作的苹果酒样品；L苹果酸(纯色谱)；L乳酸(色谱纯)；L苹果酸(分析纯) ；甲醇 (色谱 纯) ；甲酸(色谱纯 )。

2、实验仪器

分析天平0.1mg；

漩涡混合器 ；

数控超声波清洗器 ；

循环多用真空泵 ；

紫外线检测器 高效液相色谱仪；

pH计 。

3.样品预处理

室温平衡苹果酒样品后，先用滤纸过滤 ，再用0过滤.45um微孔滤膜过滤，稀释 3.3倍 ，直接进样 。

四、仪器及其条件

色谱柱：C18 (3.5um X4.6mm ×75mm )；

柱温：25℃ ；

流动相：0.1%甲酸 3%甲醇 .45um真空过滤 混合纤维树脂膜；

流速 ：0.5mL／min ；

进样量 ：20ul；

检测波长：210nm 。

有机酸定性：将苹果酒提取液色谱图与苹果酸和乳酸标准色谱图进行比较，根据保留时间初步确定苹果酒中有机酸的类型，辅助定性加样外标法和光谱图数据

有机酸定量：配制L一苹果酸和L一种乳酸混合标液作为母液，依次稀释6个浓度 (苹果酸5000、4000 、3000、2000、 1000 5000mg／L ；乳酸 2000 ， 1500， 1000 ，500， 200 ， 1000mg／L )。

根据高效液相色谱仪的分析条件，对各浓度梯度的混合样品进行试验，每个水平点重复进样3次，峰面积 (Y) 质量浓度(X，mg／L)绘制标准曲线 。

5.色谱柱的选择

在苹果酒的有机酸高效液相色谱仪检测中，重要的是选择有机酸的色谱分离条件，包括 色谱柱型号 、流量比、流量 、检测波长等 。

液相色谱柱是液相色谱的分离系统，在混合物中各组分的准确性和定量中起着重要作用。为了使苹果酒在高效液相色谱仪上具有良好的分离效果，首先选择了使用的色谱柱。

本实验选用了3 型柱 ，即

①C18柱 ，5um ×4.6mm× 250mm ；

② T3柱，5um × 4.6mm ×250mm；

③ C18柱，3.5um ×4.6mm ×75mm 。

以苹果酸乳酸混合样品和自制苹果酒为样品，调查了3 柱的分离效果，并在相同的洗脱程序下进行了测试。色谱图在相同的分析时间内得到T3 柱具有较好的分离效果；考虑到分离效果相似， C18柱能在较短的时间内将苹果酸和乳酸有效分离，只需12min可以分析样品。这是因为 C18 柱(3.5um ×4.6mm ×75mm) 是一种快速分离色谱柱 ，粒径小于普通柱，为 3.5um 。与传统的高效液相色谱仪相比，快速分离柱高效液相色谱仪具有分离问题短、分析速度快、流相消耗小、分析成本低等优点。为了有效地完成测试工作，本研究在峰分离效果好的前提下缩短了所需的分离时间，所以我们较终选择了 C18(3.5um ×4.6mm ×75mm) 柱作为实验用分析柱